Rh - Synevo faktor meghatározása

Általános információ

Az egyént Rh-pozitívnak tekintjük, ha vörösvértestjei expresszálják a D-antigént, és az Rh-negatív kifejezés a D-antigén hiányára utal.A D-antigén hiánya a fehér populációban élő egyedek 15-17% -ában található meg, más populációkban ritkábban fordul elő. A fehér populációban a D antigén hiánya az RHD gén deléciójának köszönhető, míg az ázsiai és a fekete populációban inkább a gén inaktiválásával, mintsem annak deléciójával áll összefüggésben. .

Egyes D-antigént expresszáló eritrociták az agglutinációhoz anti-D reagenssel történő hosszabb inkubálást igényelnek. Ezeket az eritrocitákat D-pozitív antigének tekintik, és gyengének D-nek nevezik, korábban D u-nak hívták (az esetek kevesebb mint 1% -ában). A gyenge D fenotípus a következő három mechanizmus egyikén keresztül fordul elő 5:

1. a) egy D fehérjét kódoló RHD gén öröklődése gyengült antigén expresszióval: gyakoribb a fekete populációban és a Dce haplotípussal, a fehér populációban pedig a DCe vagy DcE haplotípussal társul.
2. b) a D-gén kölcsönhatása más génekkel: azok az egyének, akiknek a D-génje a C-génhez képest transzpozícióban van (pl .: Dce/Ce), a D-gén expressziójának gyengülését mutatják.

Azok a személyek, akiknek e két mechanizmus valamelyikével gyenge a D fenotípusa, D-pozitív eritrocitáknak való kitettség után nem alkotnak alloantitesteket.

1. c) egy olyan antigén D komplexet kódoló gén öröklődése, amelyből hiányzik néhány epitóp, más néven részleges D; ezek az egyének anti-D-t képesek termelni, ha transzfúzióban vannak D-pozitív eritrocitákkal. Ezek közül a D VI-ben található a legkevesebb epitóp, és ezeknél az embereknél van a legmagasabb az immunizálás kockázata, de szignifikánsan alacsonyabb, mint a negatív D-embereknél 3 .

Az alacsony D-értékű donorokat Rh (D) pozitívnak kell tekinteni; fontos, hogy ne tévesen jelöljék meg Rh negatívként, mivel a gyenge D antigén immunválaszt indukálhat, ha transzfúzióval Rh negatív egyénhez 1; 3; 5. A gyenge D-vel rendelkező személyeket transzfúzióba lehet hozni Rh-pozitív vérrel (a D VI kivételével), és a terhes nőknek nincs szükségük anti-D 2 immunglobulin-profilaxisra; Megfelelő anti-D monoklonális reagens használata esetén a legtöbb, korábban D u-nak besorolt ​​antigéndeterminátort rutin körülmények között már nem szabad megkülönböztetni a D-től. .

A null Rh fenotípus akkor fordul elő, ha az eritrociták legalább két lehetséges mechanizmus révén nem expresszálják az Rh antigéneket: egy abnormális Rh asszociált glikoproteint kódoló gén öröklődése normál RHD és RHCE génekkel, vagy az R-asszociált RHCE gén mutációjának öröklődése negatív módon. Az Rh null fenotípus a vörösvértest szerkezeti rendellenességeivel társul a sztomatocitózissal és a hemolízissel. Ezek az egyének olyan alloantitesteket alkotnak, amelyek kölcsönhatásba lépnek az összes vörösvértesttel, az Rh null 5 kivételével .

Az anti-Rh antitestek alloimmunizációval fordulnak elő, az Rh rendszerben vagy a terhességben kialakuló inkompatibilis transzfúziókat követően. Rendkívül ritkán természetes antitestek jelenhetnek meg az Rh rendszerben, ismert antigén ingerek nélkül (anti-E, anti-C w), a legtöbb esetben klinikailag irrelevánsak 1; 3. A hemolitikus immunszegénységekben is az autoantitestek gyakran rendelkeznek anti-Rh 1 aktivitással .

A legtöbb anti-Rh antitest IgG, különösen IgG1 és IgG3 (hiányos agglutininek), bár némelyik IgM lehet, és általában nem aktiválja az 5 komplementet. Az IgM típusú kötőanyag antitestek általában átmenetiek és az immunizálás kezdetén fordulnak elő 1. A leggyakoribbak az anti-D antitestek, amelyek az újszülött hemolitikus betegségét és súlyos hemolitikus transzfúziós reakciókat okozhatnak. Gyakoriságuk jelentősen csökkent az anti-D profilaxissal Rh-negatív, Rh-pozitív magzatú terhes nőknél. Az anti-C, c, E, e antitestek az újszülött hemolitikus betegségével és az enyhe transzfúziós hemolitikus reakciókkal társulnak 5 .

Az eritrociták Rh kinyomtatását monoklonális anti-D szérumokkal végzik, amelyek sóoldatban reagálnak, és tartalmaznak humán IgM-et (amely nem detektálja a D VI kategóriát) 3 és poliklonális IgG antitesteket, ez utóbbit fel lehet használni az antiglobulin tesztben is. D gyenge 2. Emberi vagy szarvasmarha-albumint adnak az anti-Rh szérum előállításához, amely módosítja a tápközeg dielektromos állandóját és kedvez az Rh-pozitív vörösvértestek agglutinációjának 1 .

Ajánlások az Rh faktor meghatározására

• transzfúzió előtt;
• invazív vagy műtéti beavatkozás előtt, amely potenciálisan vérzési szövődményekkel járhat, amelyek transzfúziót igényelhetnek;
• anya és gyermek antepartum és posztnatális immunhematológiai monitorozása;
• a véradóknak.

A rutinszerű vérvizsgálat nem utal más Rh antigének meghatározására, mint az Rh faktor D. A teljes Rh fenotípus meghatározása véradóknál javallott, mérlegelni kell lányok és premenopauzás nők transzfúziója során, krónikusan transzfúziós betegeknél és szabálytalan anti-eritrocita antitestekkel rendelkező betegek 3 .

Betegképzés - nem szükséges előzetes képzés; hasznos információk a meghatározást megelőzően végzett makromolekuláris oldatokkal végzett infúziós kezelésekről, az elmúlt 120 nap transzfúziói 4 .

Begyűjtött minta - a) kapilláris vér az ujj pépéből; b) vénás vér 4 .

Betakarítási konténer - b) adalékanyagok vagy aktiváló gél nélküli vákuumozó (vörös vagy színtelen kupak); automatikus módszerhez: 4 ml EDTA-t tartalmazó vakutainer (sötétlila fedél) 4 .

Betakarított mennyiség - b) amennyire a vákuum lehetővé teszi 4 .

A bizonyíték elutasításának okai - erősen hemolizált minta 4 .

A minta stabilitása - a vizsgálatot azonnal elvégzik, ha ez nem lehetséges, a mintát 48 órán át 2-8 ° C-on tartják; az automatikus módszer esetében a vérminta stabilitása 7 nap 2-8 ° C-on 4 .

Betakarítás után szükséges feldolgozás - szobahőmérsékleten történő teljes koaguláció után a szérumot és az alvadékot eltávolítjuk. A megmaradt vörösvértestekből 40% -os szuszpenzió készül a saját plazmájában vagy sóoldatban. A kártya agglutinációs módszerhez 5% vörösvértest szuszpenziót készítenek az 1. speciális szuszpenziós közegben; Az automatikus módszerhez a vérmintát centrifugáljuk, hogy plazmát kapjunk, és behelyezzük az analizátorba (a plazma a vörösvértestek felett marad) 4 .

A meghatározás módszere - a következő módszereket hajtják végre a Synevo laboratóriumaiban:

- hemagglutináció a tányéron anti-D IgM monoklonális reagenssel 4. A meghatározást két különböző típusú monoklonális antitesttel végzik, és a teszt magában foglalja az autológ kontrollt (albuminos kontroll - a beteg eritrocitáit azzal a környezettel vizsgálják, amelyben a monoklonális Acs találhatók), valamint az O kontrollcsoport vörösvérsejtjeit, Rh pozitív és Rh negatív 1; .

- agglutináció és gélszűrés kártyákon meghatározandó eritrocita antigén-specifikus reagenssel (egér vagy humán monoklonális antitestek) impregnált gélt tartalmazó mikrocsövekkel - közvetlen ABO-csoport vizsgálata és Ag RH1 (D) és Ag RH 1,2,3 (DCE) meghatározása.

A minták minden egyes futtatásához ismert kontrollcsoportot és Rh vért használunk .

- automatikus hemagglutinációs módszer kútlemezeken (a Synevo Központi Laboratóriumban)

A munkalapok (Erytype S) 12 tesztcsíkot tartalmaznak, mindegyik 8 üreggel (1 csík = teljes ABO teszt és Rh faktor). Az Rh meghatározásához 2 száraz monoklonális anti-D IgM szérumot használunk a 4. csík két üregének bélelésével. .

Az eredmények értelmezése

A lemezes hemagglutinációs módszerhez

Vérzettek és újszülöttek:

• Rh (D) pozitív, ha egyértelműen pozitív eredményeket (> = 2 +) kapunk mind az anti-D teszt szérumokkal, mind az autó kontroll negatív;
• Rh (D) negatív, ha egyértelműen negatív eredményt kapunk mindkét anti-D teszt szérummal, függetlenül az autó teszt eredményétől.

Gyenge eredmények elérése esetén további tesztekre van szükség (3 .

A donorokban, ha a kezdeti D-teszt negatív, akkor egy második tesztet kell végrehajtani a gyenge D kimutatására (ez nem szükséges a vérben részesülőknél, akiket Rh-negatív vérrel kell transzfundálni). A gyenge D jelenlétének meghatározása terhes nőknél megszünteti a felesleges anti-D immunglobulin-kezelést. Mielőtt a beteget gyengének D-nek jelölnénk, meg kell győződnünk arról, hogy nemrégiben került-e transzfúzió Rh-pozitív vörösvértestekkel 2 .

A kártya agglutinációs módszer esetében a pozitív reakció csak akkor érvényesül, ha a kontroll mikrotubus negatív. A pozitív reakciót az agglutinátok mikrotubulusban való + + ++++ értékre történő diszperziójától függően értékeljük az alábbiak szerint: - pozitív eredmény (++++); - gyenge pozitív eredmény (+ -tól +++ -ig); - negatív eredmény (-).

Az eredmény értelmezése az RH1 mikrotubusban (D)

Az RH1 (D) mikrotubus pozitív eredménye az RH1 (D) antigén jelenlétét jelzi a vizsgált vörösvértestek felületén. A laboratóriumban használt ABO/RH kártyák nem teszik lehetővé az összes gyengén immunogén D antigén, sem a részben RH1 fenotípus VI (D VI) kategória kimutatását

További vizsgálatokat kell végezni ezekre az antigénekre.

Az eredmény értelmezése az RH1,2,3 (DCE) mikrotubusban

Az RH1,2,3 (DCE) csőben elért pozitív eredmény az RH1 (D) és/vagy RH2 (C) és/vagy RH3 (E) antigén jelenlétét jelzi a vizsgálandó vörösvérsejtek felületén. .

Az agglutinációs reakció lejátszódása után a munkacsík minden egyes lyukát kiértékeli és automatikusan lefényképezi az analizátor, az eredményeket a következőképpen értelmezve:

• Pozitív reakció - agglutináció (az intenzitás becslése 1+ - 4+)
• Negatív reakció - nincs agglutináció
• Meggyőző reakció - a +/- reakciót az orvos értelmezi

Az összes képet és eredményt az orvos ellenőrzi és érvényesíti 4 .

Határértékek és interferencia

Hamis pozitív reakciók (pozitív albuminos kontroll)

• vörösvérsejtek tekercsben/tekercsben (mielóma, Waldenström makroglobulinémia) - a meghatározás visszaáll a vörösvértestek mosása után;
• poliaglutinarea;
• hemolitikus vérszegénységek forró autoantitestekkel (IgG antitestek jelenléte a vörösvérsejtek felületén) - a csoportot egy reagenssel állítják helyre, amelyből eltávolítják az albumint, amely anti-D kötőanyagokat tartalmaz, amelyek képesek agglutinálni a vörösvértesteket sóoldatban (anti-D sóoldat).

• az újszülött hemolitikus vérszegénysége (az antigén D-helyek blokkolása anyai antitestek által) 1;
• gyenge Rh D-vel rendelkező egyén - lehetséges gyenge és késői agglutináció; ezeket az eseteket szakszolgálatra utaljuk, ahol a gyenge D-meghatározást az indirekt anti-globulin teszt alkalmazásával végezzük anti-D IgG-vel (hiányos poliklonális) 1; 3 .

---