SARS-CoV-2 antitest teszt szakértői a MedUni Vienna osztrák egyetemektől
(Bécs, 2020.9.22.) A SARS-CoV-2 terjedésének és az új koronavírus által már előfordult fertőzések értékeléséhez - a jelenleg rendelkezésre álló PCR-tesztek mellett - megbízható és tömegpiaci elemzési módszerekre van szükség, amelyekkel a SARS- CoV-2 antitestek kimutathatók. Három osztrák egyetem - a BOKU, a Vetmeduni Vienna és a MedUni Vienna - szakértői csoportja kifejlesztette az első kvantitatív SARS-CoV-2 antitest tesztet. A Technoclone ipari partnerrel a lehető leggyorsabban sikerült kereskedelmi forgalomba hozni ezt az antitest tesztet.
Míg a közös PCR-tesztet használják a SARS-CoV-2 genetikai anyagának „keresésére”, egy antitestvizsgálat információt nyújt arról, hogy valaki fertőzött-e már az új típusú koronavírussal, és az immunrendszer antitestek termelésével reagál-e erre a fertőzésre. A SARS-COV-2 válaszolt. A megbízható és tömegesen előállított antitest-tesztek fontos eszközök a SARS-CoV-2 vírus terjedésével kapcsolatos információk és a be nem jelentett fertőzött emberek számával kapcsolatos információk megszerzéséhez. Az antitestvizsgálat ugyanis felhasználható azon emberek azonosítására is, akiknél a betegség tünetmentes volt - vagyis tünetek nélkül. Az antitestvizsgálatok így elősegíthetik a népesség immunitási szintjének jobb prognózisát, és konkrétabban alkalmazhatnak intézkedéseket a terjedés ellen. Az oltások várható jóváhagyását tekintve az antitestvizsgálatok fontos eszközei az oltás sikerének ellenőrzésére.
A vizsgálati rendszer közös alapja
Florian Krammer osztrák virológusnak (Icahn Orvostudományi Kar a Sínai-hegyen, New York/USA) a közelmúltban sikerült egy szerológiai vizsgálatot kidolgozni a SARS-CoV-2 antitestek kimutatására a vérben. Ennek alapján három osztrák egyetem - a BOKU, a Vetmeduni Vienna és a MedUni Vienna - 2020 tavaszán összefogott egy szerológiai teszt létrehozásával, amely lehetővé teszi a SARS-COV-2 antitestek specifikus és érzékeny kimutatását a vérben és a kis laboratóriumokban is alkalmazható.
A Bécsi Természettudományi és Élettudományi Egyetem (BOKU) tudósaival együtt a Bécsi Állatorvostudományi Egyetem kifejlesztette ezeknek az antitestvizsgálatoknak az alapját. Az antitest teszt létrehozásának technikai és klinikai vonatkozásait kutattuk. A bécsi Vetmeduni immunológusok és biokémikusok közötti szoros együttműködés a BOKU és a MedUni Vienna szakértőivel, valamint a helyi gazdaság szponzorának támogatása jelentősen felgyorsította a tesztrendszer fejlesztő munkáját. "A konzorcium ereje és gyors sikere annak köszönhető, hogy minden partner hozzájárult a speciális szaktudásához, amely a tesztrendszer felállításához, teszteléséhez és validálásához szükséges" - mondja Wilhelm Gerner, a bécsi Vetmeduni Immunológiai Intézet munkatársa. Tehát rövid idő alatt sikerült kiváló minőségű vizsgálati eljárást kidolgozni.
Fehérjék antitestvizsgálatokhoz Ausztriában
A Természettudományi és Élettudományi Egyetemen a Biotechnológia (DBT), valamint az alkalmazott genetika és sejtbiológia (DAGZ) tanszék tudósaiból álló részlegek közötti konzorcium jött létre azzal a céllal, hogy a tesztek fejlesztése érdekében gyorsan előállítsanak kiváló minőségű SARS CoV-2 fehérjéket (antigéneket). biztosítani. A DBT széleskörű szakértelemmel és a szükséges infrastruktúrával rendelkezik a rekombináns fehérjék expresszálásához (előállításához) és tisztításához különböző termelési rendszerekben, például emlős- és rovarsejtekben vagy mikrobiális organizmusokban, például baktériumokban és élesztőkben, kis és nagy léptékben. A DAGZ kiterjeszti ezt a szakértelmet a növényekben a rekombináns fehérjék termelésére és cukorszerkezetük célzott módosítására.
"A tudományos kíváncsiság és a segítség igénye az elmúlt hónapokban arra késztetett minket, hogy kifejlesszük ezen antigének különböző verzióit, valamint további antigénjelölteket, és teszteljük őket alkalmasságukra antitest tesztben" - hangsúlyozza Reingard Grabherr a Biotechnológiai Tanszék a BOKU. A BOKU összetett tisztítási eljárásokat és elemzési módszereket dolgozott ki, amelyek garantálják, hogy az antigének reprodukálhatóan és különösen nagy tisztasággal állíthatók elő. A BOKU-ban előállított antigének magas minőségét sok külső partner nagyon méltatta, mivel ez az összes alapú tesztet sokkal pontosabbá és értelmesebbé teszi.
ELISA szakértelem a bécsi Vetmeduni-nál
A bécsi Állatorvostudományi Egyetem kiterjedt szakértelmével beépítette az új ELISA tesztrendszerek tervezését és kezdeti létrehozását. Az "enzimhez kapcsolt immunszorbens vizsgálatok" (ELISA) olyan módszerek, amelyekkel nagyon specifikus fehérjék, például antitestek detektálhatók. A kifejlesztett ELISA fertőzött betegekből származó mintákban képes kimutatni a SARS-CoV-2 elleni antitesteket, és két változatban áll rendelkezésre. A teszt egy változata megvizsgálja az antitestek jelenlétét a SARS-CoV-2 tüskefehérje receptorkötő doménjével (RBD) szemben. A második változat a nukleoprotein (NP) elleni antitesteket detektálja. Az NP ellen irányuló teszt érzékennyebben reagál az immunválasz korai szakaszában, de az immunválasz fő és késői fázisában az RBD ellen irányított tesztkészlet jobban korrelál a beteg immunitásával.
A biobank mint fontos erőforrás
A két teszt minőségének és robusztusságának klinikai diagnosztikai laboratóriumban történő tesztelése érdekében a MedUni Vienna a Laboratóriumi Orvostudományi Klinikai Intézet irányításával hozzájárult a diagnosztikai tesztek validálásában szerzett széleskörű szakértelméhez. Annak érdekében, hogy meghatározzuk egy antitest teszt specifitását és érzékenységét, azaz hány mintát találtunk hamis pozitív vagy hamis negatív eredményt, nagyszámú jól jellemzett szérum minta került elő a pandémiát megelőzően vagy megerősített Covid-19 betegektől. -A diagnózis vizsgálandó. A MedUni Vienna vissza tudott térni a biobankban végzett kiterjedt mintagyűjteményre és az egész Ausztriára kiterjedő hálózatra az orvosi laboratórium területén.
Kiváló minőségű és sokoldalú tesztrendszer
Végül is az akadémiai partnerek és az ipari partner, a Technoclone közötti szoros együttműködés lehetővé tette az antitest tesztek lehető leggyorsabb kereskedelmi forgalomba hozatalát. A már rendelkezésre álló antitesttesztekhez képest az újonnan létrehozott tesztrendszer fontos előnyöket mutat, amint azt Wilhelm Gerner kifejti: „Minden tanúsított laboratórium, szabványos ELISA olvasóval, elvégezheti az antitest tesztet. A vizsgálati rendszer lehetővé teszi a mintákban lévő antitest mennyiségének számszerűsítését is. Ez lehetővé teszi az antitest-titerek pontos időbeli vizsgálatát. ”Egy másik alkalmazás lehet a vakcinák jövőbeni tesztelése.
Jelenleg a legtöbb fejlesztés alatt álló vakcina csak a SARS-CoV-2 tüskefehérjéből tartalmaz területeket. Két különálló detektálórendszer létrehozásával a tüskefehérjéből és a nukleoproteinből származó RBD elleni antitestek számára a jövőbeni oltástanulmányok azt vizsgálhatják, hogy az oltott embereknél csak az RBD (antigénnel szembeni reakció) ellen termelődnek-e antitestek, vagy a háttérben egy immunreakció a keringő ellen A SARS-CoV-2 zajlik. Ebben az esetben antitestek is képződnek a nukleoprotein ellen. Ezzel fontos információk nyerhetők a vakcinák védőhatásáról.