Sejttapadás - emberek - táplálkozás - környezet
Az áramlási modell elve
Ezeknek a leukocitáknak a toborzása és aktiválása többlépcsős folyamat, beleértve a gördülést is,
(A) a köldökvénából nyert HUVEC előállítása; (B) áramlási kamra és perfúziós rendszer, valamint (C) a tapadó sejtek video dokumentálása az áramlási modell segítségével. a leukociták határozott tapadása az endotheliumhoz, a transzendoteliális diapedézis, valamint a kemotaktikailag szabályozott migráció a gyulladás helyére.
A szelektin és az integrin család endoteliális és leukocita adhéziós molekulái (pl. E-, P- vagy L-szelektin és LFA-1 (CD11a/CD18), VCAM, ICAM) elengedhetetlenek a neutrofilek extravazációjához gyulladásos folyamatok során, mint pl. közvetítik a fent említett sejtadhéziós folyamatokat.
A tapadás és gördülés vizsgálatára szolgáló in vitro modell részeként az endoteliális sejteket (HUVEC sejteket) először mikroszkóp tárgylemezeken tenyésztik. Az összefolyás elérése után a sejteket egy áramlási kamrába helyezzük, és a leukocitákat perfúziós szivattyúval vezetjük át az endoteliális sejteken, ezáltal kiszámítható és beállítható az intravaszkuláris nyíróerők.
Bal felső kép.
A statikus modell elve
Az adhézió vizsgálatára szolgáló in vitro modell részeként először endothel sejteket (HUVEC sejteket) tenyésztenek multiwell lemezeken, mint az áramlási modellben. Az összefolyás elérése után a sejteket megfelelő aktivátorokkal stimuláljuk, és korábban festett mononukleáris sejtekkel (T-limfocitákkal) inkubáljuk, majd fluorimetriásan mérjük a festés intenzitását, amely arányos a tapadó sejtekkel.
A kalcein-AM festéket a mononukleáris sejtek festésére használják. Ez a nem fluoreszcens festék behatol a sejtmembránba, és nem specifikus észterázok hasítják intracellulárisan, és a fluorogén nemáteresztő kalcein képződik. A Calcein, más néven Fluorexon néven, fluoreszcein-származék, gerjesztési maximuma 495 nm-nél (gerjesztés) és emissziós maximuma (emissziója) 515 nm-nél van, ezért kvantitatív módon rögzíthető a Fluoroscan olvasóban.
Próbaértékelés
Videó által támogatott dokumentáció segítségével a képsorokat a folyamatmodell keretein belül értékelik, és rögzítik a mononukleáris sejtek képegységenként történő csatolását.
Ábra jobbra fent.
Az áramlási modell költsége
Kb. 100 €/4 üreges szaporítóanyag
Statikus modellköltség
Alkalmazási példa
A tejoligoszacharidok hatása a leukociták emberi endothelsejtekhez való tapadására (Bode és mtsai 2004a, b és Reiss és mtsai 2004)