A FETOPROTEIN NUKLEAR RECEPTOR FEJLESZTÉSI ÉS METABOLIKUS FUNKCIÓINAK VIZSGÁLATA

DANIEL MALENFANT-TANULMÁNY A FETOPROTEIN NUKLEÁRIS VEVŐ ÁTALAKÍTÁSI TÉNYEZŐ FEJLESZTÉSI ÉS METABOLIKUS FUNKCIÓJÁRÓL (Ph.D.) ORVOSTUDOMÁNY KAR UNIVERSITÉ LAVAL QUÉBEC 2012 Daniel Malenfant, 2012

fetoprotein

Előszó Szeretnék köszönetet mondani Dr. Luc Bélangernek, aki lehetővé tette számomra, hogy kutatómunkámat laboratóriumában végezhessem, valamint anyagi támogatásáért a végzős tanulmányaim során. Köszönetet mondok Dr. Jacques Côtének és Génome Québecnek, hogy támogatták doktori kutatásom egy részét. Köszönet Alain-Roger Bataille-nak és Éric Paquet-nek a dolgozat 3. fejezetében bemutatott adatok megszerzésében és elemzésében való közvetlen részvételükért. Nagy köszönet mindazoknak, akik doktori tanulmányaim alatt Dr. Bélanger laboratóriumában dolgoztak, különösen Sylvie Roy, Denis Allard, Frédéric St Pierre, Alain Lamontagne, Julie Poulin, Chantal Courtemanche, Jean-François Paré és Mariève Jacob -Wagner . Erkölcsi és erkölcstelen támogatást nyújtottak számomra, és színesítették napjaimat. Végül köszönöm mindazoknak, akikkel fociztam, másztam, és különösen a "Les Barbares de Québec" sárkányhajós csapatomnak órákig tartó szórakozásért és önmagunk felülmúlásáért. Nagyon élvezem, hogy körülötted vagyok és a határokat tolom veled.

"A türelem és az idő hossza több, mint erő vagy düh" -Jean De la Fontaine

Tartalomjegyzék Összefoglaló. i Absztrakt. ii Előszó. iii Tartalomjegyzék. v Táblázatok listája. vii Az ábrák felsorolása. viii A rövidítések listája. ix 1. fejezet Bevezetés. 1 1.1 A máj. 2 1.1.1 Építészet. 2 1.1.2 Fejlesztés. 6 1.1.3 Funkciók. 9 1.1.4 Májbetegség és rák. 15 1.2 Átírás. 18 1.2.1 Általános. 18 1.2.2 Szabályozási elemek. 23 1.2.3 Átírási tényezők. 27 1.3 Máj transzkripció. 30 1.3.1 Hepatocita nukleáris faktor (HNF). 31 1.3.2 CAAT/enhancer kötő fehérje (C/EBP). 34 1.3.3 Nukleáris receptorok. 37 1.3.4 Egyéb tényezők. 43 1,4 FTF (fetoprotein transzkripciós faktor). 44 1.4.1. Általános. 44 1.4.2 Felépítés és tevékenység. 46 1.4.3 Pályázók. 48 1.4.4 Szövet kifejezése. 50 1.4.5 Funkció. 51 1.5 A doktori kutatás célja. 54 2. fejezet A Fetoprotein Transcription Factor (FTF) gén elengedhetetlen az embriogenezishez és a koleszterin homeosztázishoz, és egy DR4 elem szabályozza. 56 2.1 Előszó. 57 2.2 Összegzés. 57 2.3 Kivonat. 58 2.4 Bevezetés. 59 2.5 Kísérleti eljárás. 60 2.5.1 FTF géninaktiválás. 60 2.5.2 Helyi hibridizáció. 62 2.5.3 LacZ-tevékenység. 62 2.5.4 Microarray elemzés. 63 2.5.5 Északi-foltok. 63 2.5.6. Kvantitatív PCR. 63 2.5.7 Elektromobilitás-váltás és Scatchard tesztek. 64 2.5.8 Western Blot. 65

A táblázatok felsorolása 2.1. Táblázat: A keresztezett FTF +/- egerek embrióinak genotípusai (E, embrionális nap). 72 2.2. Táblázat: A szérum koleszterinszint vad típusú (+/+) és FTF-haploid (+/-) egerekben kontroll étrendet vagy 2% koleszterin diétát tápláltak 5 napig. 73 2.3. Táblázat: A máj gén expressziójának mikroszkópos elemzése felnőtt hím Ftf +/- egerekben. 75 3.1. Táblázat: A mitokondriumhoz kapcsolódó FTF géncélok felnőtt egér májban. 98 3.2. Táblázat: Az FTF potenciális transzkripciós partnerei. 99

xv TR pajzsmirigy receptor TRE pajzsmirigy hormon válasz elem trna transzfer RNS TSS transzkripció kezdő hely (transzkripció iniciációs hely) UTP uridin-trifoszfát UTR lefordítatlan régió VDAC1 feszültségfüggő anion csatorna 1 VDR D-vitamin receptor (NR1I1) (D-vitamin receptor) VLDL nagyon alacsony sűrűségű lipoprotein (nagyon alacsony sűrűségű lipoprotein) w/v súly/térfogat (tömeg/térfogat) WNT szárny nélküli típusú MMTV integrációs helycsalád vad típusú (sauvage) X-gal 5-bróm-4-klór-3-indolil-béta-D -galaktopiranozid XRCC5 ATP-függő DNS-helikáz II (röntgenjavítás, kiegészítve a hibás javulást a kínai hörcsög sejtekben 5)

1. fejezet Bevezetés

4 1.1. Ábra: A máj morfológiája. Központ: az emberi máj általános anatómiája. Betétek: A) Máj lebeny B) Ér- és epeúti rendszerek: 1- A kapu vénájának elágazása; 2- A májartéria elágazása; 3- epevezeték; 4- Korlátozó lemez; 5- Centrilobularis véna; 6- májsejtek; 7- Sinusoidák; Rózsaszín nyíl: véráramlás; Zöld nyíl: epefolyás (dobozok között); Doboz: 8- epe canaliculus; 9- Hering-csatorna; 10- Epeút C) Sinusoid: 11- Csillagsejtek; 12- Szinuszos kapillárisok fénye; 13- Disse tér; 14- Bile canaliculus; 15- hepatocita; 16 - szoros csomópont; 17- Küpffer-sejtek; 18- Májüregi sinusoidok endoteliális sejtje. A www.embryologie.ch oldalról és a Merck orvosi információ kézikönyve - második otthoni kiadás, online változat 1.1.1.4. Zonáció Bár a hepatociták elrendezése egyenletesnek tűnik, a lobulák funkcionális zónája van az erek helyzete alapján, azaz a portális és centrilobularis vénák terminális ágai és a véráramlás iránya (áttekintve 2007 - ben)