Az egér belső fülének bikrosztómiájára összpontosító gyógyszeradagolási módszerek összehasonlító vizsgálata

Absztrakt

Két minimálisan invazív mikrosebészeti technikát mutatunk be rágcsálóknál, amelyek specifikus gyógyszereket juttatnak a középfülbe, hogy elérje a belső fület. Az első eljárás magában foglalja a dobhártya szúrását, az úgynevezett bullostomiát; a második egy transzimpán injekció. Mindkét klinikai eljárás emberi intratympanát emulál.

A kitozán-glicerofoszfátot (CGP) és a Lactate Ringer puffert (RL) használták biokompatibilis vivőanyagként a helyi gyógyszeradagoláshoz. A CGP egy nem mérgező, biológiailag lebomló polimer, amelyet széles körben használnak gyógyszerészeti alkalmazásokban. Szobahőmérsékleten viszkózus folyadék, de testhőmérsékleten félszilárd fázissá szilárdul. Az RL izotóniás oldat, amelyet intravénásan alkalmaznak emberben. Ennek a járműnek egy kis mennyiségét pontosan elhelyezik a kerek ablakfülke (RW) fölött egy bullostomia segítségével. A transzimpán injekció kitölti a középfület, és kevesebb kontrollt, de szélesebb hozzáférést biztosít a belső fülhöz.

A két biztonsági technika profilját funkcionális és morfológiai tesztek segítségével tanulmányozták és összehasonlították. A hallást úgy értékeltük, hogy rögzítettük az Auditory Brainstem (ABR) válaszát a mikrosebészet előtt és után többször is. A cytoarchitecture és a konzerváló cochleáris struktúrák szintjét standard szövettani technikákkal vizsgáltuk fix és dekalcifikálatlan paraformaldehid cochleáris mintákban. Ezzel párhuzamosan nem kapcsolt cochleáris mintákat vettünk és azonnal lefagyasztottunk, hogy kvantitatív reverz transzkriptáz-polimeráz láncreakcióval (qRT-PCR) elemezzük a gyulladás markereinek génexpressziós profilját.

Mindkét eljárás alkalmas gyógyszerek bejuttatására az egerek középfülében, bár a transtympanikus injekció kevésbé invazívnak bizonyult a bullostomiához képest.

Bevezetés

Itt leírjuk és összehasonlítjuk azt a két műtéti módszert, amelyet finomítottak az egerek belső fülébe történő helyi gyógyszerbevitelre. A két biztonsági technika profilját funkcionális, morfológiai és molekuláris tesztekkel értékeltük. A hallást az agytörzsi válasz (ABR) 26, 27 alkalmazásával értékeltük, a mikrosebészet előtt és után, különböző időpontokban. Végpont-eljárásokat használtunk a cochlea boncolására, és összehasonlítottuk e két mikrosebészeti eljárás anatómiai, sejtes és molekuláris hatását.

Jegyzőkönyv

Gondoskodjon arról, hogy az állatkezelési eljárások megfeleljenek a nemzeti és nemzetközi előírásoknak. A protokoll követi az Európai Közösség RD 2010/63/EU, illetve a spanyol 53/2013 irányelveket.

Kezelés 1. Általános információk az állatokról

Adagit etesse az egereket szokásos étrenddel és ivóvízzel. Ellenőrizze az egészséget és a jólétet a Laboratóriumi Állatok Tudományos Egyesületeinek Szövetségének (FELASA) követésével __gVirt_NP_NNS_NNPS 9.

3. Jármű előkészítése

1. Készítse elő és használja nak,-nek járműmegoldások ben nak,-nek steril körülmények között.
   MEGJEGYZÉS: A folyékony oldatokat általában gyorsan eltávolítják az Eustachian-csövön keresztül. Különböző injekciós adagolási rendszerek alkalmazhatók a gyógyszer középfülben való tartózkodási idejének növelésére, beleértve a hidrogéleket és a nanorészecskéket 32.
   1. A CGP-hidrogél előállításához 75% deacetilezett kitozánt 0,2 M ecetsavban oldva 1,5-2 tömeg% kitozánoldatot kapunk. Adjon 9% glicerofoszfátot (w/w) ehhez az oldathoz. 7. Készítse elő az oldatot közvetlenül beadás előtt, és a hidrogélt felhasználásig 4 ° C-on tárolja.
      MEGJEGYZÉS: A CGP-hidrogél mérsékelten viszkózus, de ezen a hőmérsékleten még mindig injektálható. 4 ° C alatt szilárd fázissá válik, megakadályozva annak alkalmazását. Alkalmazás után a CGP fázisátalakuláson megy át egy félszilárd géllé kb. 15 percig, 37 ° C-on.
   2. Alikvot (0,5 ml) kereskedelmi RL puffert és felhasználásig 4 ° C-on tároljuk.

4. Mikrosebészeti eljárások

5. A Cochlear cytoarchitecture morfológiai értékelése

6. Kochleáris gén expresszió

Reprezentatív eredmények

A hallást az ABR tesztelte a mikrosebészet előtt és után is, hogy értékelje a hallásfunkcióra gyakorolt ​​hatást (1A. ábra). Az ABR regisztereket altatásban végezték, hogy elkerüljék az állatok műtárgyainak mozgását és feszülését, és ezáltal javítsák reprodukálhatóságát. 27. Az állatok érzéstelenítésére az ABR teszt során tipikusan ketamin alapú vagy izoflurán inhaláció intraperitoneális kombinációit alkalmazták. A ketamin/xilazin kombináció rövid hatású (2-3 perc) indukciót és stabil, biztonságos karbantartási fázist biztosít az ABR rekordok végrehajtása közben. Meg kell jegyezni, hogy az izoflurán hatással lehet az ABR érzékenység mérésére 38. ABR regiszterek esetében a subdermális elektródákat meghatározott helyekre helyezik el. (1B. ábra) és megmérik az elektromos impedanciát. Ha az impedancia 3 kohm vagy annál nagyobb, akkor az elektróda helyzetét ellenőrizni kell, hogy elkerüljük az ABR hullám amplitúdójának változását.

---