Kettős közvetlen vérinjektálás a Cisterna Magnába, mint a subarachnoidális vérzés modellje

Összegzés

Ebben a protokollban egy szabványosított subarachnoidális vérzés modellt (SAH) írtunk le autológ teljes vér kétszeri injektálásával a ciszterna magnába. A kettős injekciós eljárás nagyfokú szabványosítása közepes és akut SAH modellt jelent, relatív mortalitási biztonsággal.

cisterna

Absztrakt

Bevezetés

Előfizetés szükséges. Kérjük, ajánlja a JoVE-t könyvtárosának.

Jegyzőkönyv

Valamennyi eljárást H. Castel felügyelete alatt hajtották végre, összhangban a Francia Etikai Bizottsággal és a tudományos célokra felhasznált állatok védelméről szóló 2010/63/EU európai parlamenti és tanácsi irányelv irányelveivel. Ezt a projektet a helyi CENOMEXA és az országos etikai bizottságok engedélyezték az állatkísérletek és -vizsgálatok terén. A 8-12 hetes C57Bl/6J Rj hím egereket (Janvier) standard ellenőrzött környezeti körülmények között helyeztük el: 22 ° C-on 1 ° C-on, 12 órás/12 órás világos/sötét ciklusban, valamint vízzel és élelemmel ad libitum.

1. Állítsa be a SAH műtétet, és készüljön fel az injekcióra

2. állat (8-10 hetes C57BL/6J hím egerek) készítmény

3. SAH indukció

4. Műtét utáni követés és a kísérlet vége

  1. Közvetlenül a műtét után izolálja és helyezze a decubitus fekélyes egeret egy túlélő takaróval a hátán egy nyitott dobozba, miközben felépül.
  2. Naponta mérje le és figyelje meg az egerek viselkedését az áldozatig (pl. D7 műtét után).
  3. Jelentős súlycsökkenést (a súly> 15% -a) klasszikusan az emberi végpontok között észlelnek. A "hajlított hátsó testtartás", a lassú mozgások, a dőlésszög, a sérülésekből eredő rendellenes hangképződés és/vagy a jelentős agresszív viselkedés szintén fontos jelei az állatok szenvedésének. Ha ezen jelek bármelyike ​​vagy a jelek kombinációja bekövetkezik, az állat megfigyelését a megjelenéstől számított néhány órán belül fokozni kell. Ha az állat jólléte 48 órán belül romlik vagy nem javul, úgy tekintjük, hogy elviselhetetlen szenvedés érhető el, és eutanáziát végeznek.
  4. A megválasztáskor az érzéstelenített egereket lefejezéssel feláldozzuk, és további elemzés céljából szedjük le az agyakat.
  5. Eutanázia (lefejezés) izoflurán érzéstelenítés után (5%).

Előfizetés szükséges. Kérjük, ajánlja a JoVE-t könyvtárosának.

Reprezentatív eredmények

SAH agyi érgörcs
Ahogy El Amki és mtsai. A 22. ábrán a basilaris artéria (BA), a középső agyi artéria (MCA) és az elülső agyi artéria (ACA) látható. A CVS az SAH modellben volt jelen kettős intraciszternális vérinjekcióval ACA-ban, MCA-ban vagy BA-ban D3-tól D10-ig a műtét után. Röviden (2A. Ábra), egér feláldozása és lefejezése után az agyakat összegyűjtöttük, majd 4% paraformaldehidben (PFA) utófixáltuk, majd -80 ° C-on lefagyasztottuk, majd kriosztáttal 20 m-es keresztirányú szeletekre vágtuk. Hematoxilin- és eozinfestést alkalmaztunk BA (interaurális e0,40 mm; Bregma -3,40 mm), MCA (interaurális 2,58 mm; Bregma -1,22 mm) és ACA (interaural e4,90 mm; Bregma 1,10) esetében mm) a CVS-azonosítás lehetővé tétele érdekében a színes ablaktáblák szisztematikus képfelvételével mikroszkóp kamerával. A makroszkopikus CVS hiányának vagy jelenlétének felméréséhez minden egyes festett artéria esetében kiszámítottuk a lumen terület és a falvastagság arányát. Minél alacsonyabb az arány, annál nehezebb a CVS. Például CVS fordult elő BA-ban SAH agyakban, mint a színlelt egéragyak (2B. Ábra)), hanem más nagy agyi artériákban is (MCA, ACA, az adatokat nem mutatjuk be 22).

Vita

Ebben az összefüggésben a modell hasonló a klinikai SAH fiziopatológiához az SAH-val társult CVS tekintetében. Általában a CVS 1 óra múlva következik be 40 patkányban, és 3 nap múlva 17 egérben az MCA és a BA esetében az endovaszkuláris perforációs modellben. A vérinjekció prechiasmatikus ciszterna modelljében a CVS incidenciát két 49. és nyolc. 37. nap között mutatták ki patkányokban. Patkányokban a cisterna magna kettős injekciós modelljében a CVS 10 perc 29 és 3 nap 31 között alakult ki. Elsőként írtuk le a CVS kinetikus megjelenését az SAH egérmodelljében kettős injekcióval, a CVS-t 3 napig meghatároztuk a fő agyi artériákban (ACA, MCA és BA), és az SAH 22 utáni 10. napig fennmaradt, közel ehhez mi figyelhető meg SAH betegeknél. Ez utóbbi modell a SAH minősített modelljeként definiálható, elég szigorú, halálozás nélkül ahhoz, hogy lehetővé tegye a CVS-t célzó mechanizmusok és terápiák tanulmányozását.

A SAH-modell egy másik kontrollálatlan paramétere az átlagos artériás vérnyomás (MABP) lehetséges változása volt, amelyet egy túl gyors vérinjekció 27 váltott ki. Valójában a MABP általában kísérleti SAH után emelkedik, hogy fenntartsa az agyi perfúziós nyomást, majd utána az alapvonalra csökken. A SAH modellben vért vagy aCSF-t (kb. 10 l/perc) injektáltunk alacsony sebességgel, hogy elkerüljük ezeket a MABP-variációkat. Ami a neurobiológiai eseményeket illeti ebben a modellben, utánozva az embereken tapasztaltakat, korábban bebizonyítottuk, hogy az SAH kettős vérinjekciós modellje hosszan tartó CVS-t, mikrotrombózist és agykárosító agykárosodást indukál, beleértve a hibás paravascularis diffúziót a 3. naptól a 10. napig. látta 22. Azonban a legfrissebb adatok, amelyek leírják, hogy a CSD részt vesz az SAH-hoz társuló DCI-ben13, erősen támogatják az ilyen típusú vizsgálatok folytatását az egér kettős injekciós modelljében. Ennek lehetővé kell tennie a tudományos áttörést a CSD-t célzó új terápiák pozitív hatásaival kapcsolatban.

Összegzésképpen azt szeretném mondani, hogy a teljes artériás vér kettős injekciója a magna ciszterna modelljébe egy elsajátított modell, amely egyszerű módszert kínál az emberi SAH fiziopatológia utánzására, ideértve a CVS-t, a mikrotrombózisokat, az érgyulladásokat, a neurológiai hiányosságokat és a mortalitási arányt. Validált modell az új terápiás megközelítések tesztelésére az SAH-val összefüggő kóros halálozás kezelésében.

Előfizetés szükséges. Kérjük, ajánlja a JoVE-t könyvtárosának.