Új módszer a krónikus traumás encephalopathia modellezésére a Drosophila Protokollban (lefordítva

Összegzés

Itt egy újfajta megközelítést írunk le a Drosophila melanogaster traumatikus zárt fejű agykárosodásának okozására. Módszerünknek az az előnye, hogy az ismétlődő hatásokat közvetlenül a fejre állítható erővel biztosítja. A gerinctelen rendszer további feltárása segíthet megvilágítani a krónikus traumás encephalopathia patogenezisét.

Absztrakt

Bevezetés

Előfizetés szükséges. Kérjük, ajánlja a JoVE-t könyvtárosának.

Jegyzőkönyv

1. Az ütközésmérő összeszerelése (1. ábra )

2. A sztrájkmechanizmus működése

  1. Érzéstelenítsen egyetlen 2 napos felnőtt nőstény légyet kagyló CO 2 felhasználásával.
  2. Finoman egy kefével fordítsa rá a légy tartóra. Óvatosan ütögesse meg a tartót úgy, hogy a légyfej látható legyen a hegyén kívül. Ha a légy-proboszkóp a csúcs külsején van kitéve, óvatosan távolítsa el a hegy belsejéből egy tompa 1 ml-es fecskendő tűvel.
    MEGJEGYZÉS: Ügyeljen arra, hogy a légyprosciust a tartóban tartsa. Ellenkező esetben a légy elpusztulhat szívószál sérülés miatt.
  3. Húzza meg a legyet Ho emelje fel a fecskendő csövét a csatlakozóval úgy, hogy a légy feje lefelé nézzen.
  4. Állítsa a gáznyomást 100 kPa-ra. Állítsa be az áramlási sebességet a kísérlet tervének megfelelően.
  5. Gyorsan forgassa újra az áramlásszabályozó nyomógombját, hogy az ütközésmérő egyszer eltalálja a légfejet.
  6. Emelje fel a legyetartót és helyezze rá egy héjra. Fordítsa meg a légy tartóját, és óvatosan koppintson az oldalra, hogy eleje a légy. Hagyja a legyet egy üres üvegben, hogy összegyűjtse.

3. Videóval támogatott mozgáskövetés

  1. Töltsön meg egy 6 cm átmérőjű Petri-csészét átlátszó szilícium-elasztomerrel a követési aréna elkészítéséhez. Hagyjon 3 mm-es rést a szilícium és az edény fedele között, hogy a legyek szabadon járhassanak, de ne repülhessenek.
  2. Minden alkalommal altassa el a négy legyet a színlelt vagy kezelt csoportból, és helyezze őket az arénába. Hagyja a legyeket 1 órán át 22 ° C-on.
  3. Helyezzen egy töltéscsatolt eszköz (CCD) kamerát az arénák fölé, és rögzítse 5 percig.
  4. Elemezze a rögzített mozgási pályákat a Ctrax szoftverrel (a Caltechnél ingyenesen elérhető) 16. Exportálja a nyomon követett adatokat a programozási nyelvvel kompatibilis formátumban (például Matlab), és elemezze az adatokat a keretenként megtett távolságnak megfelelően. Számítsa ki az egyes járatok átlagos gyalogolási távolságát, és kombinálja az összes többi rögzített legyével/csoporttal, hogy megkapja az átlagos összesített távolságot, amelyet az ugyanazon csoport állománypopulációja tett.

Előfizetés szükséges. Kérjük, ajánlja a JoVE-t könyvtárosának.

Reprezentatív eredmények

A többszörös agysérülések hosszú távú hatásainak felméréséhez öt egymást követő sztrájkból származó mTBI protokollt alkalmaztunk 5,0 l/perc áramlási sebességgel, az egyes sztrájkok között 24 órás gyógyulási periódusokkal. Az mTBI mozgásfunkcióra gyakorolt ​​hatásának vizsgálatához egy video-segített mozgáskövető rendszert használtunk a légmotoros viselkedés elemzésére. A legyek öregedése után 20 nappal a kezelés után az mTBI-vel kezelt csoport csökkent gyalogos aktivitást és megtett távolságot mutatott a szimulátor csoporthoz képest (4. ábra NÁL NÉL és ; szimulált csoport: 6,49 ± 0,72; n = 28 a kezelt csoporthoz viszonyítva: 4,3 ± 0,47, n = 32; p 4C ábra, a szimulátorcsoporthoz (n = 129) képest a kezelt legyek (n = 100) szignifikánsan csökkent átlagos élettartammal (36,9 ± 2,7 Vs. 26,3 ± 0,9 d) és szignifikánsan csökkent maximális élettartammal (49,3 ± 2,4 Vs). 34,7 ± 1,4 d).