A krónikus vastagbélgyulladáshoz társított vastagbélrák rágcsáló vakbélműtét modellje pontos lokalizációval

Összegzés

A bemutatott protokoll a vakbél (vakbél tapasz) könnyű műtéti eltávolítását írja le egérben, majd a gyulladásos bélbetegséghez társuló vastagbélrák indukcióját. Az egér apendektómia ezen modellje lehetővé teszi a vakbél biológiai szerepének vizsgálatát az emberi gyomor-bélrendszeri betegség patogenezisében.

Absztrakt

Bevezetés

A klinikai vakbélműtét egy szokásos műtéti eljárás, amely elsősorban a gyulladás (pl. Vakbélgyulladás) következtében fellépő függelék eltávolítását jelenti 1, 2, 3. Az emberi vermiform függelék biológiai funkciója azonban továbbra is ellentmondásos 4, 5, 6. A vakbélet a vakbélből a vastagbélbe vetülő vestigialis maradványnak tekintették. Egészen a közelmúltig evolúciós, immunológiai, morfológiai és mikrobiológiai vizsgálatok arra utaltak, hogy a függeléknek külön funkciói lehetnek. Ezek a szerepek magukban foglalják az immunglobinok (pl. IgA és IgG) termelését, a B-sejtek és a T-sejtek sokféleségét, amelyek kritikusak az adaptív immunválasz szempontjából a bélhez kapcsolódó limfoid szövetekben (GALT), és a vastagbél rekonstitúcióját kommenzális mikrobiotával 6 Ads, 7 Hirdetések, 8 hirdetés, 9 (be), 10 és több év, 11 év, Egyesült Államok (, 12 .

Elülső vakbélműtétben vagy akut vakbélgyulladásban szenvedő betegek klinikai epidemiológiai vizsgálatai szintén rámutattak annak lehetséges szerepére az emberi betegségek, például gyulladásos bélbetegség (IBD), vastagbélrák és nem gyomor-bélrendszeri rák, bél (pl. Parkinson-kór és szív- és érrendszeri) patogenezisében. betegség) 13, 14, 15, 16, 17, 18. Például egy nagy ázsiai populációs kohortvizsgálat 75 979 appendectomiás beteggel nemrégiben szignifikáns összefüggést mutatott az appendectomia és az azt követő vastagbélrák kialakulása között, amely az egyik leggyakoribb rosszindulatú daganat, magas incidenciával és mortalitással 14, 19. Ennek megfelelően az állatnak az emberre hasonlító vakbélműtét megfelelő modelljének felállítása hasznos lehet a függelék biológiai funkcióinak és molekuláris mechanizmusainak tanulmányozásához a betegség patogenezisében.

Számos emlősnek van függeléke vagy mellékszerve, beleértve a főemlősöket, a nyúlalakúakat (pl. Nyulakat), egyes rágcsálókat és az erszényes állatokat. Kis laboratóriumi állatoknál, amelyeket gyakran használnak, a nyúl morfológiailag emberhez hasonló vermiform 21., 22. függelékkel rendelkezik, de a nyulakban a GALT rendkívül nagy az emberekéhez képest, mivel a szövetek többsége a Peymer foltokban található, amelyek a vékonybél és vastagbél 21. Ezenkívül a nyúl eltérő limfoid follikuláris felépítést, a T-sejtek eloszlását és az emberek immunglobulin-sűrűségét mutatja, ami miatt mellékleteik tanulmányozása nem megfelelő 21 .

Az egerek a leggyakoribb állatmodellek, amelyeket az emberi patofiziológia tanulmányozására, valamint a különböző létező és új terápiák 23, 24, 25 tesztelésére használnak. Az egerekben a vakbél csúcsán található nagy, egyetlen fehér limfoid fürt, amelyet vakbélfoltnak neveznek, feltételezik, hogy hasonló funkciókat lát el, mint az emberi függelék 26, 27, 28. Mégis, gyakorlatilag nehéz elválasztani a vakbélfoltot a cecumtól egerekben. Eddig a vakbélgyulladás kiváltását célzó gyakori sebészeti eljárások egérmodellben viszonylag nagy bemetszést (pl. 1-2 cm) jelentenek a hasfalon keresztül, hogy hozzáférjenek az egész vakbélhez (Kiegészítő 1. táblázat) 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36 .

A gasztrointesztinális betegséghez kapcsolódó vakbélműtét modelljének elkészítéséhez ez a jelentés könnyű műtéti protokollt mutat be az egerek korrekciós vakbél elmozdulásához. Ezt követi az AOM genotoxikus ágens és a gyulladásgátló szer DSS együttes beadása a vastagbélgyulladással összefüggő vastagbélrák kiváltására, hasonlóan az embernél tapasztaltakhoz. Kimutatták, hogy az IBD a bélrák kockázati tényezője 37, 38. A vastagbélgyulladással járó krónikus vastagbélrák kombinációja e, b. jól megalapozott, és az olvasók hivatkozhatnak Neufert et al. és Thaker et al. a részletes eljárásokhoz 39, 40. Ez a reprodukálható és gyors egér vakbélműtét modell felhasználható a függelék által modulált bélgyulladás és a vastagbél mikrobiota tanulmányozására, különösen az IBD és a vastagbélrák kialakulásában és előrehaladásában.

Előfizetés szükséges. Kérjük, ajánlja a JoVE-t könyvtárosának.

Jegyzőkönyv

Az állatokkal kapcsolatos összes eljárást a Xi'an Jiaotong Egyetem Intézményi Állattenyésztési és Felhasználási Bizottsága hagyta jóvá (XJTULAC2019-1023).

1. Egér vakbélműtét

2. A vastagbélgyulladással járó krónikus vastagbélrák kiváltása AOM-mal és DSS-sel

MEGJEGYZÉS: Végezze el ezt az eljárást 7 nappal a vakbélműtét után.

3. A vastagbélgyulladás és a daganat értékelése (70 nappal az AOM beadása után)

Feláldozzuk az egereket CO2 belélegzésével 10% töltési sebességgel az eutanáziakamrában, majd méhnyak diszlokációval.
Betakarítsuk az egész vastagbélt az ileokolikus csomópont felett a végbélnyílásig.
A vastagbelet hosszirányban kinyitva tegye ki a lumen oldalát. Vágja az egész vastagbélt 10 cm hosszú darabokra, és rögzítse a vastagbélszövetet 10% -os formalinban 72 órán át hematoxilin és eozin (H és E) festés céljából.

Előfizetés szükséges. Kérjük, ajánlja a JoVE-t könyvtárosának.

Reprezentatív eredmények

Az egér vakbélműtét modell létrehozása

A krónikus vastagbélgyulladással összefüggő vastagbélrák egér vakbélműtétjének ezt a modelljét az 1. ábrán látható szekvenciális műtéti és indukciós lépések követésével lehet előállítani.. A vakbél leggyakoribb helyzete a bal és a jobb iliac fossa, amelyet a has középvonala követ (2. ábra)). A cecum hasi metszés előtti sikeres lokalizációja a tapintási módszerrel közel 70% (Kiegészítő információk, S2 táblázat). A vakbélműtét eljárásai főleg hat fontos lépésből állnak (3. ábra). A vakbélműtét műtét során egy 0,5–1,0 cm hosszú középvonalú metszés elengedhetetlen a műtéti trauma minimalizálása érdekében (3. ábraNÁL NÉL). Intraperitoneális szivárgás esetén a mesangialis erek lekötése és a cecalis törzs lezárása szükséges, egyszerű kötés helyett futó varratokkal (3. ábra).B, C, D, E).