Matrix Engineering gyakornoki útmutató - PDF ingyenes letöltés

Utasítások a Matrix Engineering szakmai gyakorlatra WS 2012/13 Gyakornokság menedzsment: Társszerzők: Dr. Katja Franke Michael Ansorge Liv Kalbitzer Tina König Andreas Müller Christina Müller Biotudományi, Gyógyszerészeti és Pszichológiai Kar Biokémiai Intézet Biofizikai Kémiai Professzor

útmutató

Tartalomjegyzék Egészségügyi és biztonsági utasítások (rövid forma) 5 Az 1–4. Kísérlet alapjai 6 1. kísérlet - Az I. típusú kollagén izolálása 9 Előkészületek a 2–4. Kísérlethez A kollagén- és fibrinmátrixok előállítása Az ECM mikroszerkezetének elemzése 17 4. kísérlet - sejtmigráció és morfológia 20 5. kísérlet - sejtvontatási erő mikroszkópia 22

11. ábra: A gélréteg előállítása, a polimerizációs oldatot pipettázzuk a Sigmacote-DG-re, majd lezárjuk a reaktív DG-vel. 4. Távolítsa el a Sigmacote DG-ket csipesszel 5. Áztassa a géleket H2O-ban 30 percig 6. Szárítsa meg a géleket vákuumszárító szekrényben, kb. 45 percig szobahőmérsékleten. 4. Centrifugálás (a polimer bevonat felvitele) 1. Készítse elő az oldatot ˆ 0,14% w/w Szűrjük a PSMA-t (100 000 g/mol) THF-ben (oldat (PTFE fecskendőszűrő, pórusméret 0,2 µm) 2. Centrifugáljuk a fordulatszámot 4000 fordulat/perc, 1500 fordulat/perc, 20 s sebességgel 3. Ragasszuk az üveggyűrűket Eukitt-szal 5. Hagyjuk a géleket megduzzadni 1 . Helyezze a DG-ket egy nagy Petri-csészébe. 2. Adjon hozzá PBS-t. 3. Zárja le a Petri-csészét Paralm-tal és tegye egy éjszakára hűtőbe.