Plazma (aktív) ghrelin
Általános információk és ajánlások a jégeső meghatározásához
A Ghrelin egy peptidszerkezetű hormon (28 aminosav), amelyet az emésztőrendszer nyálkahártyájának endokrin sejtjei (főleg a gyomorban lévő P/D1 sejtek), valamint az éhség serkentéséért felelős hasnyálmirigy epsilon sejtjei termelnek.
1999-ben izolálták a patkány gyomrából, és az agyalapi mirigyben a növekedési hormon szekretagóg receptor (GHS-R) endogén ligandumaként írták le. A Ghrelin a GHRH-tól (növekedési hormon felszabadító hormon) eltérő módon stimulálja a növekedési hormon felszabadulását.
Kémiailag a ghrelin egyedülálló szerkezettel rendelkezik az aminosavlánc 3. helyzetében lévő szerinmaradékok acilezése révén oktánsavval - zsírsavval -, amelyet a nemrégiben azonosított GOAT (ghrelin O-acil-transzferáz) enzim katalizál. Az oktanoiláció elengedhetetlen a hormon biológiai aktivitásához.
A Ghrelin prekurzorként szekretálódik - preprogrelin; A poszttranszlációs változásokat követően mind az acilezett forma - acil-ghrelin -, mind a nem-acilezett forma - des-acil-ghrelin keletkezik. A legújabb vizsgálatok szerint a ghrelin mindkét típusa jelen van a keringésben, de a des-acil-ghrelin túlsúlyban van, ez az endokrin aktivitástól mentes forma, de bizonyos sejtes hatásokkal bír.
A ghrelin orexigén hatása az íves és paraventrikuláris hipotalamusz magokra kifejtett hatásoknak köszönhető, amelyekről ismert, hogy részt vesznek az étvágyszabályozásban. Így a ghrelin aktiválja az orexigén peptideket (NPY - neuropeptid Y és AgRP - agouti-rokon peptidek) tartalmazó neuronokat, és gátolja az anorexigén peptideket (CART - kokain és amfetamin kapcsolatos transzkriptum és POMC - pro-opiomelanocortin) tartalmazó neuronokat. A leptin ellentétes hatást gyakorol ugyanazokra a neuronokra, ami azt sugallja, hogy a két hormon egy olyan szabályozó rendszer kiegészítő összetevője, amely tájékoztatja a központi idegrendszert az akut és krónikus energiahiányról. Viszont az íves magban lévő idegsejtek impulzusokat továbbítanak az laterális hipotalamusz területén orexint tartalmazó neuronokhoz, ezáltal serkentik az étvágyat.
A Ghrelin nemrégiben szerepet játszik mind az inzulinszabályozásban, mind a glükóz homeosztázisban. Így a legtöbb tanulmány fordított összefüggést mutat a szisztémás ghrelin és az inzulin szint között. Az inzulin csökkenti a ghrelin szintet, a ghrelin pedig gátolja az inzulin szekrécióját. A ghrelin hiperglikémiás hatása egyrészt endokrin hatásainak, másrészt a májsejtekre gyakorolt közvetlen hatásnak köszönhető a glükoneogenezis stimulálásában. A cukorbetegségben betöltött szerepét tekintve az alacsony ghrelinszint az inzulinrezisztenciával, a magas vérnyomással és a II. Típusú cukorbetegség prevalenciájával társult. Sőt, alacsony ghrelinszintet mutattak ki I. típusú cukorbetegségben szenvedő betegeknél is (úgy tűnik, hogy a hormon szerepet játszik a béta-hasnyálmirigy sejtjeinek regenerálásában) 1 .
Betegképzés - a betakarítást reggel éhgyomorra (éhgyomorra) kell végezni 4 .
Begyűjtött minta - vénás vér; a vacutainert nagyon óvatosan rázzuk meg fordítva, és azonnal jégre tesszük; a lehető leghamarabb a laboratóriumba szállítják 4 .
Betakarítási konténer - szürésig hűtőszekrényben tárolt EDTA K3 + aprotinin (rózsaszín fedél) vakuumozó az aprotinint az acilezett ghrelin 2 proteáz lebontásának megakadályozására használják .
Betakarított mennyiség - mindaddig, amíg a vákuum megengedi 4 .
Betakarítás után szükséges feldolgozás - a betakarítástól számított legfeljebb 30 percen belül a plazmát centrifugálással (előnyösen 2-8 ° C-ra hűtött centrifugában) 10 percig, 3500 fordulat/perc sebességgel elválasztjuk; műanyag pipettát használnak a plazma elválasztására; az elválasztott plazmát azonnal 3-4-re savanyítjuk (minden 1 ml plazmához 100 μl 1 N HCl-t adunk), majd ismét 5 percig 3500 fordulat/perc sebességgel centrifugáljuk; a felülúszót egy másodlagos csőbe viszik át; a mintát azonnal megmunkálják; ha ez nem lehetséges, a plazmát -20 ° C-on tároljuk műanyag tartályban (polipropilén vagy polisztirol); a laboratórium területén kívül gyűjtött mintákat a fagyasztott minták tartályába kell szállítani 2; .
A minta stabilitása - a plazma -20 ° C-on vagy -70 ° C-on hosszú ideig stabil; ne olvasszon/fagyasszon 2; 4 .
Módszer - ELISA; a laboratóriumunkban végzett vizsgálat az acilezett formát - az aktív grelint - detektálja.
Referenciaértékek -.
Kimutatási határ - 4 pg/ml 4 .
Az eredmények értelmezése
A plazma szintje közvetlenül minden étkezés előtt emelkedik, és az étkezés után 1 órán belül a minimumra csökken. Az étkezés utáni csökkentés nagysága és időtartama a kalória számától és a bevitt étel zsírtartalmától függ. Az étkezés utáni szuppresszió elhízott betegeknél alacsonyabb, a ghrelin valószínűleg hozzájárul az elhízás patogeneziséhez.
A keringő ghrelin szintek fordítottan korrelálnak a testtömeg-indexdel (BMI). Így az anorexia nervosa és a cachexia szintje növekszik, az elhízás csökken és normalizálódik az ideális súly megszerzése után. Kivétel a BMI-vel való összefüggés alól a Prader-Willi-szindróma, amelyben az elhízás magas ghrelin-szinttel társul.
A ghrelin szintje más klinikai körülmények között megváltozik:
Csökken: gyomor bypass és gastrectomia, H. pylori fertőzéssel járó krónikus gyomorhurut, hyperthyreosis (magyarázza az ilyen körülmények között általában tapasztalható fogyást), rövid bél szindróma (valószínűleg a ghrelin termelő szövetek elvesztése miatt), férfi hipogonadizmus, policisztás petefészek-szindróma, Cushing-szindróma.
Az alacsony ghrelinszint függetlenül összefügg az I. és II. Típusú cukorbetegséggel.
Alacsonyabb ghrelinszintről számoltak be időseknél.
Növekedés: bulimia nervosa, krónikus táplálékkorlátozás, gyomor- vagy hasnyálmirigy-ghrelinomák 1 .
Határértékek és interferencia
A Ghrelin plazmaszintjét számos hormon, gyógyszer és egyéb anyag befolyásolja:
Csökken: inzulin, orális vagy intravénás glükóz, szomatosztatin és természetes analóg kortikosztatin, anorexigén peptidek (YY peptid, oxintomodulin, urokotin-1), pajzsmirigyhormonok, glükokortikoidok.
Növekszik: acetilkolin agonisták, GHRH és arginin együttes adagolása, tesztoszteron (hipogonadizmusban szenvedő betegeknél), ösztrogén és inzulin-növekedési faktor-1 (IGF-1 anorexia nervosa betegeknél) 1 .
Bibliográfia:
- Adelino F. Leite-Moreira és João-Bruno Soares. A ghrelin fiziológiai, kóros és lehetséges terápiás szerepe. In Drug Discovery Today, 12. kötet, sz. 2007. április 7–8.
- Hiroshi Hosoda et al. Optimális begyűjtési és tárolási feltételek a ghrelin méréseihez: A Ghrelin oktanoil-módosítása gyorsan hidrolizálódik desacil-ghrelinné a vérmintákban. In Clinical Chemistry, 2004, 50. évf., 6. szám, 1077-1080.
- Korner J és mtsai. A Roux-en-Y gyomor by-pass műtét hatása a plazma ghrelin, YY peptid és inzulin éhomi és étkezés utáni koncentrációira. A J- Clin. Endokrinol. Metab. 90, 359 + 365, 2005.
- Synevo Laboratórium. Az alkalmazott munkatechnológia konkrét hivatkozásai. 2012. Ref Típus: Katalógus.
- M. Kojima, K. Kangawa. Ghrelin: felépítés és funkció. In Physiol Rev 85: 495–522, 2005.