Myositis profil - Blot - Synevo
Informţii általános és ajánlások a myositis profil meghatározásához
Az idiopátiás gyulladásos myopathiák olyan állapotok csoportja, amelyeket a végtagok proximális izomzatának gyengesége, izomsorvadás, izomkárosodás biokémiai és elektromiográfiai jelei, szövettani rendellenességek, jellegzetes bőrelváltozások jellemeznek. 0,1-1/100 000 lakos/év gyakorisággal fordulnak elő, és nőknél gyakoribbak. Ebbe a csoportba tartoznak: polimiozitisz, dermatomiózitisz, zárványtestekkel járó myositis, neoplazia (paraneoplasztikus szindróma) és más kötőszöveti betegségekhez kapcsolódó myositis 6; 7 .
A szisztémás szklerózishoz hasonlóan a specifikus autoantitestek is nagy szerepet játszanak ezen állapotok különféle változatainak diagnosztizálásában és osztályozásában (ideértve az átfedési szindrómákat is), különösen azért, mert az antinukleáris antitestek prevalenciája a lupushoz képest kifejezetten alacsony (40-60%). szisztémás bőrpír. Ezek az autoantitestek több antigén célt ismernek fel: transzfer RNS típusok (tRNS-ek), aminoacil-t-RNS szintetázok, szignálfelismerő részecskék komponensei (SRP), transzlációs faktorok, az átalakító komplexum komponensei. nukleoszóma, de a legfontosabbak azok, amelyek az aminoacil-t-RNS szintetázok ellen irányulnak (enzimcsalád, amely minden sejtmagban megtalálható, és amelynek szerepe egy bizonyos aminosav kötése a saját tRNS-jéhez). Az autoantitestek jelenléte a betegség bizonyos alcsoportjaihoz kapcsolódik, amelyek prediktív értékkel bírnak a különféle klinikai megnyilvánulások és a betegség prognózisa szempontjából 1; 2; 6; 7 .
Anti-Jo-1 antitestek hisztidil-t-RNS szintetáz enzim ellen irányulnak. In vitro ezek az autoantitestek az enzim konformációs epitópjaihoz kötődnek és gátolják annak katalitikus aktivitását. Az antigén dimer formában van, és a citoplazmában helyezkedik el; az alegységek molekulatömege 50 kDa. Az anti-Jo-1 antitestek prevalenciája a polimiozitiszben és a dermatomiozitiszben 20-40%; autoantitestek korán felismerhetők, néha megelőzve a tünetek megjelenését. Gyermekeknél az anti-Jo-1 antitestek rendkívül ritkák. Az anti-Jo-1 antitestekkel rendelkező betegeknél a tünetek tipikus triádja van: polimiozitisz (> 90%), poliszinovitisz (artralgiák, nem aeroszív deformáló ízületi gyulladás, az esetek 50% -ában tenosynovitis), fibrózisos alveolitis vagy tüdőfibrózis (60%). Hozzátehetjük még: Raynaud-jelenség (40%), láz (20%), "szerelő keze" (30%). Ezt az állapotot anti-szintetáz szindrómának nevezik. Az anti-Jo-1-ben szenvedő kaukázusi betegek több mint 90% -ának van HLA allélja DR3 .
Bár más aminoacil-t-RNS szintetázokra irányított antitestek: anti-PL-7 (anti-treonil-t-RNS szintézis), anti-PL-12 (anti-alanil-t-RNS szintetáz), anti-EJ (anti-glicil-t-RNS-szintetáz) és az anti-OJ (anti-leucil-t-RNS-szintetáz) sokkal kevésbé gyakoriak, mint az anti-Jo-1, ugyanazokkal a klinikai szintetáz 6. Általában egy betegnél csak egy típusú anti-szintetáz antitest van, de olyan eseteket is leírtak, amikor mind az 5 autoantitestet kimutatták. Az anti-szintetáz szindróma mérsékelten reagál a kortizon terápiára. Mivel az összes szintetáz megtalálható a citoplazmában (a fehérjeszintézis helyén), az autoantitestek finom citoplazmatikus megjelenést okoznak közvetett immunfluoreszcenciában, szubsztrátként Hep-2 sejteket használva. .
Anti-PL-7 3-6% -os előfordulással fordulnak elő myositisben szenvedő betegeknél, különösen átfedő szindrómákban (SLE, szisztémás szklerózis, interstitialis tüdőfibrózis).
Anti-PL12 3% -os prevalenciával észlelhetők myositisben szenvedő betegeknél.
Anti-EJ és HL-ellenes fordulnak elő polimiozitiszben, de átfedő szindrómákban is 3 .
Mi-2 elleni antitestek nukleáris helikáz (a transzkripciós szabályozásban részt vevő nukleáris fehérjekomplex) ellen irányulnak; a dermatomyositisben szenvedő betegek 15-30% -ában fordulnak elő (magas specifitással rendelkeznek erre az állapotra), és ritkán a polymyositisben szenvedő betegeknél. Az anti-Mi-2 antitesttel rendelkező betegek többsége hordozza a HLA DR7 allélt. A betegség formája jóindulatú, jó válasz a kortizon terápiára 6; 7 .
Anti-Ku antitestek egy heterodimer típusú nukleoláris fehérje antigén ellen irányulnak, amely két alegységből áll, amelyek molekulatömege 70, illetve 80 kDa, amelyek egy DNS-függő protein-kináz enzim komplex egyik alkotóeleme. Ez a komplex fontos szerepet játszik az immunglobulinok és a T-sejtek szintézisében szerepet játszó gének transzlációjával, DNS-javításával és átrendeződésével kapcsolatos sejtes folyamatokban. Az anti-Ku antitestek a kötőszöveti betegségek széles körében találhatók meg, különösen átfedik a scleroderma-myositis szindrómákat, de az SLE-t is (3-10%). A közvetett immunfluoreszcencia megjelenése szemcsés típusú (foltos); Leírtak egy összefüggést a HLA DQw1 alléldal is. Az anti-Ku antitestek prevalenciája az autoimmun betegségekben változó, fontos elem az etnikum. Például É-Amerikában és Európában anti-Ku antitestekkel társult SLE-esetekről számoltak be, Japánban azonban nem. Az elsődleges Sjögren-szindróma, valamint az elsődleges pulmonalis hipertónia más olyan klinikai állapot, amelyet általában az anti-Ku.
Anti-PM-Scl antitestek 11-16 polipeptidből álló nukleoláris komplex ellen irányulnak, amelynek funkcióját még nem határozták meg 6. Az antitesteket a scleroderma-polymyositis (sclerodermatomyositis) átfedéses szindróma eseteinek több mint 90% -ában detektálják, de csak
Az összes myositis esetek 8% -a és
A szkleroderma összes esetének 3% -a 5. A prognózis ebben a betegcsoportban viszonylag kedvező. 2. immunfluoreszcenciában homogén nukleoláris megjelenésű HLA DR3 és anti-nukleáris antitestekkel társul; 6. A két fő autoantitestet külön-külön kimutatják a laboratóriumban: anti PM-Scl100 és anti PM-Scl75 3 .
Anti-SRP ("Jelfelismerő részecske") reagál az SRP komplex 54 kDa-os komponensével, amely közvetíti az újonnan szintetizált fehérjék transzportját az endoplazmatikus retikulumba. Polimiozitiszben és dermatomiozitiszben szenvedő betegeknél írták le őket (az esetek legfeljebb 4% -áig), főleg fekete nőknél. Az anti-SRP-k a nekrotizáló myopathia markerei, amelyeket izomfájdalommal járó vázizomzat súlyos proximális és szimmetrikus akut gyengesége jellemez; a szívizom is érintett. A betegség a megnövekedett mortalitási rátával és a kortizon terápiára adott rossz reakcióval jár együtt; 6 .
Anti-Ro52 egy 52 kDa-os antigén ellen irányulnak, és leírásuk szerint reumatikus és nem reumatikus betegségekhez kapcsolódó nem specifikus autoantitestek. 100% -ban jelen vannak veleszületett atrio-kamrai blokkban vagy újszülött lupusban lévő magzatok vagy újszülöttek anyáiban 6. A polimiozitiszben/dermatomiozitiszben szenvedő betegek bizonyos százalékának anti-Ro52-je van anti-aminoacil-t-RNS szintetáz antitestekkel (különösen anti-Jo-1) kombinálva 1; 2 .
Betegképzés - à jeun (éhgyomorra) vagy étkezés utáni (étkezés után) 3.
Begyűjtött minta - vénás vér .
Betakarítási konténer Antikoaguláns nélküli vakutainer szétválasztó géllel/anélkül 3 .
Betakarítás után szükséges feldolgozás - centrifugálással különítsük el a szérumot 3 .
A minta mennyisége - legalább 1 ml ser 3 .
Az elutasítás okai megpróbálni
A minta stabilitása - az elválasztott szérum 14 napig stabil 2-8 ° C-on, és hosszú ideig -20 ° C-on. Ne olvassa le/ne fagyassza le 3 .
Módszer - immunblot. Az alkalmazott antigének natívak (Jo-1) és rekombinánsak.
A csíkok különböző tisztított antigénekkel rögzített membrán chipekből állnak: Mi-2, Ku, PM-Scl 100, PM-Scl 75, Jo-1, SRP, PL-7, PL-12, EJ, OJ, Ro-52.
Az első lépésben a tisztított antigénekkel töltött csíkot a beteg hígított szérumával együtt inkubáljuk. Ha specifikus antitestek vannak a szérumban, akkor azok a szalag megfelelő antigénjeihez kötődnek. Mosási lépés után a csíkot lúgos foszfatázzal jelölt humán anti-IgG konjugátummal inkubáljuk. A konjugátum az antigén-antitest komplex IgG részéhez fog kapcsolódni. Mosás után a meg nem kötött konjugátumot eltávolítjuk, és hozzáadjuk a festőoldatot (enzim szubsztrát) - egy kolorimetriás enzimdetektáló rendszert. Ha a megkötött konjugátum jelen van, akkor az enzimatikus reakció sötétkék színű terméket eredményez a specifikus antitestek által elfoglalt sávokban. Tehát a csík szintjén látható sávok specifikus antitestek csíkszinten az egyes antigénekhez való kötődésének eredményeként jönnek létre.
Minden csíkon van egy belső vezérlőcsík. Az intenzív színreakció megjelenése ezen a szinten igazolja, hogy az immunblot-teszt minden szakaszát helyesen hajtották végre 3 .
A teszt eredményeinek végleges értelmezése egy szoftver segítségével történik (a csíkok beolvasása után), amely a jel intenzitásától függően a csík minden sávjához pontot ad, az alábbiak szerint:
JELI ÉRTÉKELÉS
JELI INTENZITÁS
Referenciaértékek